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人外周血白細胞*培養(yǎng)基說明書

簡要描述:

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更新時間:2018-11-03

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人外周血白細胞*培養(yǎng)基說明書

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產(chǎn)品名稱

人外周血白細胞*培養(yǎng)基說明書

英文名稱

Medium human peripheral white blood cells.

規(guī)格 

100mL

人外周血白細胞*培養(yǎng)基說明書功能:
(1)       血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
(2)       表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1,參與血管壁的炎癥反應。
(3)       與血管疾病的進展和穩(wěn)定有關(guān)。
 生理變化:
(1)       主動脈硬化。
(2)       主動脈瘤
(3)       主動脈鈣化。
基本特性:
(1)       組織來源于正常大鼠大動脈組織。
(2)       鑒定:肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。
(3)       原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)       每凍存管細胞數(shù):>5×105 cells/1ml。
(5)       肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗證。
(6)       不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。


5 mlProteinase K,recomb.,PCR Grd.

25 mlProteinase K,recomb.,PCR Grd.S

2 x 1.25 ml (for 100 reactions of 50 µl final reaction volume)FastStart TaqMan Probe Master

5 ml (4 x 1.25 ml) for up to 500 reactions of 20 µl final reaction volumeFastStart SYBR Green Master

500 U (2 x 250 U) for up to 200 reactions of 50 µl final volume each containing 2.6 U enzyme blendExpand High Fidelity PCR System, dNTPack(up to 5 kb)

500 U (2 x 250 U) for up to 200 reactions of 50 µl final volume each containing 2.5 U FastStart Taq DNA PolymeraseFastStart High Fidelity PCR System, dNTPack(up to 5 kb)

500 U (2 x 250 U) for up to 200 reactions of 50 µl final volume each containing 2.6 U enzyme blendExpand High Fidelity PCR System ( up to 5 kb)

500 U (2 x 250 U) for up to 500 reactions of 20 µl final volume each containing 1 U enzyme blendExpand High FidelityPLUS PCR System 500 U(up to 5 kb)
人外周血白細胞*培養(yǎng)基說明書短小芽胞桿菌 Bacillus pumilus尖孢鐮刀菌棉花專化型 Fusarium oxyporium f. sp. vasinfectum

亞側(cè)耳 Hohenbuehelia serotina三七根腐病菌 Fusarium solani

MDA-MB-435S(人腺導管細胞)宇佐美曲霉 Aspergillus usamii

人腎管狀上皮細胞*培養(yǎng)基DH82(犬巨噬細胞)

宇佐美曲霉 Aspergillus usamii直邊正青霉 Eupenicillium lineolatum

HFL1(人肺成纖維細胞)豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna

U937/人髓系白血病細胞香菇 Lentinula edodes

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis

H-97(人高轉(zhuǎn)移肝細胞)中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii

根瘤菌小鼠脂肪細胞

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae傘枝梨霉 Absidia corymbifera

大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞*培養(yǎng)基C2C12(小鼠成肌細胞)

膠韌革菌植物桿菌 Lactobacillus plantarum
人外周血白細胞*培養(yǎng)基說明書運輸和保存:
視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線

 

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